水中大腸菌群的檢測(cè)是人類生活飲用水安全的保障，能有效預(yù)防人體被大腸菌群感染。我國(guó)早前檢測(cè)水質(zhì)大腸菌群采用的方法是平皿計(jì)數(shù)法，此方法操作較為復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)人員也需要有較高的技術(shù)素養(yǎng)，普及實(shí)施較難。

　　酶底物法(Defined Substrate Technology,DST)是目前全球都在廣泛使用的大腸菌群檢測(cè)方法，近些年來我國(guó)也開始嘗試引進(jìn)使用，并于2018年將此方法納入國(guó)標(biāo)，該方法操作簡(jiǎn)便快捷，時(shí)間周期短，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，不需要有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件即可進(jìn)行，對(duì)操作人員要求也不高，下面優(yōu)爾普就來介紹一下酶底物法檢測(cè)大腸菌群的具體步驟。

酶底物法檢測(cè)大腸菌群儀器

酶底物法檢測(cè)大腸菌群操作方法

1、工作原理

　　酶底物法是在選擇性培養(yǎng)基上產(chǎn)生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的細(xì)菌群組，其能分解色原底物釋放出色原體，使培養(yǎng)基呈顏色變化，以此來檢測(cè)水中的大腸菌群。

2、立科酶底物法簡(jiǎn)介

　　立科酶底物法使用Colitech試劑進(jìn)行檢測(cè)，這種試劑符合《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法》，其采用GB/T5750.12-2006中固定底物技術(shù)的MMO-MUG培養(yǎng)基，當(dāng)試劑加入含有總大腸菌群細(xì)菌組的水樣，目標(biāo)細(xì)菌在含有固定底物ONPG-MUG的培養(yǎng)基中繁殖，大腸菌群細(xì)菌組產(chǎn)生的特異性生物酶β-半乳糖苷酶能分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的固定色原底物ONPG，產(chǎn)生特征性黃色熒光，同時(shí)水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性B-葡萄糖苷酸酶能分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的固定熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性藍(lán)色熒光，以此定性檢測(cè)水中大腸菌群和大腸埃希氏菌。

　　當(dāng)水樣中少數(shù)非目標(biāo)細(xì)菌的生物酶試圖和ONPG、MUG反應(yīng)并干擾檢測(cè)結(jié)果時(shí)，Colitech培養(yǎng)基中特殊配方的基質(zhì)會(huì)抑制其反應(yīng)過程，控制假陽性的產(chǎn)生。同時(shí)，這些特殊培養(yǎng)基質(zhì)可以有效促使目標(biāo)細(xì)菌的生物酶和固定底物反應(yīng)，所以假陰性發(fā)生率比傳統(tǒng)方法更低。

3、儀器與試劑

儀器：培養(yǎng)箱(36±1℃)、高壓蒸汽滅菌器、定量盤(51孔和97孔)、立科程控定量封口機(jī)、試管、稀釋瓶、移液管、量筒.

酶底物法檢測(cè)儀器及其配置

試劑：立科Colitech酶底物法檢測(cè)試劑，滅菌稀釋水.

4、酶底物法檢測(cè)操作步驟

1)水樣稀釋

　　檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所需水樣為100ml，若水樣污染嚴(yán)重可進(jìn)行稀釋(取10ml水樣加入到90ml的滅菌稀釋水中，必要時(shí)可加大稀釋度)。本實(shí)驗(yàn)取20個(gè)水樣分別進(jìn)行總大腸菌群(1-10號(hào))和糞大腸菌群(11-20號(hào))的檢測(cè)。

大腸菌群水樣取樣瓶

2)定性試驗(yàn)

　　用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養(yǎng)基，搖晃至溶解，以36±1℃的溫度在培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。

3)定量試驗(yàn)

　　用100ml的無菌稀釋瓶量取100ml水樣，加入專用培養(yǎng)基，搖晃至溶解，將該溶液導(dǎo)入51孔(總大腸菌群)和97孔(糞大腸菌群)的定量盤內(nèi)，然后將定量盤放入立科程控定量封口機(jī)封口，以36±1℃的溫度在培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。

酶底物法檢測(cè)水質(zhì)大腸菌群操作具體流程：http://www.bjadg.cn/news/175.html

5、結(jié)果判定

酶底物法檢測(cè)大腸菌群對(duì)比

1)定性反應(yīng)

　　對(duì)水樣培養(yǎng)24小時(shí)后進(jìn)行結(jié)果判定，如顏色變成黃色，則判定為陽性，表示水中含有大腸菌群，若水樣未發(fā)生顏色變化，則判定為陰性，表示水樣中不含大腸菌群。定性結(jié)果以大腸菌群檢出或未檢出作報(bào)告。

2)定量反應(yīng)

　　對(duì)培養(yǎng)24小時(shí)后定量盤內(nèi)的水樣進(jìn)行結(jié)果判定，若孔穴內(nèi)的水樣有黃色反應(yīng)則表示該孔穴中含有大腸菌群，總大腸菌群對(duì)照51孔定量盤MPN表，糞大腸菌群對(duì)照97孔定量盤MPN表，結(jié)果以MPN/L報(bào)告。若所有孔穴均未產(chǎn)生黃色反應(yīng)，以未檢出作報(bào)告。

　　有關(guān)實(shí)驗(yàn)室使用酶底物法檢測(cè)水中大腸菌群的方法步驟就和大家分享到這里了，酶底物法操作簡(jiǎn)便，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，二次污染小，無需再無菌室內(nèi)操作，滿足GB5749-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)和GB8978-1996污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)，適用于源水、瓶裝水、飲用水、畜牧用水、廢水、再生水、食品水、醫(yī)療用水等各類水樣，目前已在國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用。